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单克隆抗体技术

单克隆抗体技术

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产品名称: 单克隆抗体技术

英文名称: monoclonal antibody technique

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品牌商标: null

更新时间: 2023-07-31T09:56:51

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威斯腾生物
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单克隆抗体制备技术服务
 

单克隆抗体(单抗)应用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,通过HAT筛选,ELISA抗体检测,有限稀释克隆化,选择出具有分泌抗体功能又能无限繁殖的来源于单一B细胞的杂交瘤细胞,并产生抗体,就是单克隆抗体。单抗的最大优势是它的特异性、均一性、高效性和无限供应性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础研究和临床医学上,包括对疾病(包括癌症)的诊断、预防和治疗等方面,均显示出巨大的生命力。

实验步骤:

1. 每种抗原免疫5只Balb/c小鼠
2. 选取ELISA效价较高的小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合
3. 进行2~4次克隆化及ELISA筛选,确保杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性
4. 抗体亚类鉴定
5. 至少选择2株杂交瘤细胞的冻存,并免费提供一年的保种服务

单抗制备标准流程:
 
时间(天)制备步骤说明
1初次免疫每种抗原免疫5只Balb/c小鼠,抗原与弗氏完全佐剂
22第二次免疫抗原与弗氏不完全佐剂
43第三次免疫抗原与弗氏不完全佐剂
免疫一周后取血+ELISA检测效价
57加强免疫单独抗原
三天后采血(血清做阳性对照),取脾
60细胞融合SP2/0骨髓瘤细胞与一只小鼠(ELISA效价较高)的脾细胞融合
70-100HAT选择杂交瘤细胞ELISA效价检测筛选阳性细胞克隆
  至少进行2~4次杂交瘤细胞的亚克隆,直至细胞上清的ELISA结果阳性
率达到100%,将完成细胞建株
115-120亚类鉴定对杂交瘤细胞株所分泌的抗体进行亚类测定
120冻存细胞株每种抗原提供2株杂交瘤细胞
121-140制备腹水并纯化接种细胞制备腹水、Protein A/G 纯化
150最终提供2株杂交瘤细胞和相应Protein A/G 纯化的单抗IgG,2~5mg/株
完整的技术服务报告
完整实验记录
 
抗体的应用:制备的抗体可能用于ELISA、WB、IHC、IP等实验。
客户需提供的材料及信息:
  • 客户需要提供2mg以上的纯化蛋白质,纯度≥90%(SDS-PAGE检测),若带融合标签需说明并提供筛选蛋白
  • 如为多肽,客户要提供两种偶联不同蛋白质的多肽各4mg,未偶联多肽1mg,偶联多肽纯度≥85%
结果提供:实验报告                   免疫前血清(20μl)         免疫后血清(20μl)
抗体上清(至少3株,1ml/株)   杂交瘤细胞(3株)           抗体亚型
如需要纯化的客户增加如下结果:
纯化抗体(3株)(纯度≥90%,浓度≥1mg/ml,每株5mg)   免疫效价   抗体亲和力常数
 
相关说明:
 
A、免疫原可以为重组蛋白、天然蛋白、合成多肽、偶联小分子等。
B、客户需要承诺外的细胞株,每株价格为500元。
C、客户需要对承诺外的细胞株抗体进行纯化,价格为1500元/5mg(单独报价为1800元)。
D、如客户需要非IgG类的其他细胞株,每株价格500元,纯化费用500元/5mg(CAAS法纯化)

威斯腾实验服务流程



威斯腾生物服务项目

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分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
BioPlex悬浮芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
生长因子芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
炎症因子芯片软骨细胞培养体内血栓模型
血管生成因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
凋亡因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片基因编辑动物
电生理相关服务动物整体实验服务
膜片钳实验
细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
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