来源
Clark经典反复流产小鼠模型(CBA/J与DBA/2）
模式动物品系
雌性CBA/J，雄性DBA/2，雄性BALB/c小鼠
实验分组
正常妊娠对照组，健康未妊娠对照组，RSA模型组，RSA治疗组
实验周期
6~8 weeks
建模方法
RSA小鼠模型建立
将雌性CBA/J与雄性BALB/c小鼠按2:1比例合笼交配建立正常妊娠小鼠模型，雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠按2:1比例合笼交配建立（复发性流产）RSA小鼠模型，检出阴栓者计为妊娠第0天。
实验共分4组：
治疗组（雌性CBA/J 10只、雄性DBA/25只）
RSA模型组（雌性CBA/J 10只、雄性DBA/25只）
正常妊娠对照组 （雌性CBA/J 10只、雄性BALB/c 5只）
健康未妊娠对照组（雌性CBA/J 10只）
各组从妊娠第0日开始灌胃给药，每组10只雌鼠。
剂量根据成人70kg临床用药剂量按动物体表面积换算，灌胃容积均为0.4mL/20g。正常妊娠组和RSA模型对照组给予相同体积蒸馏水，连续灌胃给药14d，末次给药1h后处死小鼠，取其外周血和蜕膜组织。
应用
可用于研究预防和治疗RSA的药物
模型评价
流式细胞数检测PBMCs中Th17/Treg细胞比例：
分离小鼠PBMCs后，按工作浓度加入佛波酯，Ionomycin，Monensin，37°C孵育4~6h，设同型对照管和检测管。Fc受体阻断剂封闭后，分别加入CD4表面抗体染色，混匀，室温避光孵育15min后每管按操作要求先后加入固定液和破膜/溶血液，洗涤后实验管分别加入2种配色抗体，对照管加入同型对照抗体。避光孵育后，加入洗涤剂离心弃上清，重悬细胞，24h内上机检测。以CD4直方图射门，以散点图染色阳性表示Th17细胞和Treg细胞，用Cellsquest软件获取并分析数据。（一个样本分为两种染色方案，Th17：CD4-FITC、IL-17-PE；Treg：CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE）

RT-PCR检测PBMCs中FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5的表达：
分别提取各组PBMCs总RNA，并进行RNA纯度和完整性鉴定；设计引物，逆转录成cDNA，以β-actin为内参，然后进行实时荧光定量RT-PCR；采用相对定量法利用Ct计算FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5 mRNA的相对量。

组织病理学
1.HE染色观察局部组织细胞病理结构改变：
取各组小鼠蜕膜组织，包埋石蜡切片，HE染色。
2.电镜观察局部组织细胞凋亡和病理结构改变：
无菌取各组小鼠蜕膜组织，加入2.5%戊二醛进行预固定，1%锇酸进行后固定，再逐级用乙醇和丙酮进行脱水，树脂包埋，制备成超薄切片，醋酸双氧铀-硝酸铅溶液进行双重染色，置投射电镜下进行观察。
3.免疫组化分析局部组织细胞因子STAT3、STAT5表达：
4.RT-PCR检测蜕膜组织中的FOXP3、RORrt、STAT3、STAT5 mRNA表达。
5.Western blot检测蜕膜组织中的STAT3、STAT5蛋白表达

标志因子水平
6.1ELISA检测脱膜组织匀浆中的IL-2、IL-6。
收集各组蜕膜组织，组织匀浆后取上清进行ELISA检测。

6.2ELISA检测细胞因子IL-2、IL-6和TGF-β1表达：
取各小鼠血清，使用IL-2、IL-6和TGF-β1 ELISA kit，按照试剂盒说明书进行操作，在酶标仪上设定标准曲线，每个标本和标准品均设3个复孔。用酶标仪读取血清样本的吸光度值（A），通过标准曲线计算样本浓度值。

统计学分析
应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显