腺相关病毒包装服务

腺相关病毒（Adeno-associated virus）属于细小病毒科，Dependoparvovirus属，是目前发现的一类结构简单、无包膜的单链DNA缺陷型病毒，它的生命周期依赖于复制病毒的参与，如腺病毒和单纯疱疹病毒。野生型的腺相关病毒可以定点整合到人类第19号染色体的AAVS1位点，而重组腺相关病毒由于缺少整合和复制必需的两个基因而无法整合。因此，重组腺相关病毒主要以游离于染色体的附加体形式存在，并可长时间存在于非分裂细胞中。另外，腺相关病毒具有高组织特异性、良好的扩散性、低免疫原性、高安全性和稳定性。基于以上特点，重组腺相关病毒已经成为科研和基因治疗中具市场前景的病毒载体之一。

根据客户的个性化实验需求，科沿有道生物提供优质的腺相关病毒包装服务。下面是具体服务内容：

*如您对上述服务感兴趣，请您联系我们的项目经理，我们将为您提供具体实验方案和项目价格。

腺相关病毒（AAV）简介

AAV结构

腺相关病毒的直径在20-26nm范围内，其直径为腺病毒的1/5，慢病毒的1/4，呈现20面体结构，对分裂细胞和非分裂细胞均可感染。

AAV基因组

腺相关病毒含有约4.7kb的单链线性DNA基因组。基因组两端为末端反向重复序列(ITR)，对于病毒的复制和包装具有重要作用；中间基因组编码两类蛋白Rep和Cap，Rep蛋白参与病毒的复制和整合，Cap蛋白为病毒衣壳蛋白。衣壳包含三种类型的亚基VP1、VP2和VP3，比例为1:1:10 (VP1:VP2:VP3)。基于AAV的基因组结构，基因工程化的AAV载体删除了全部AAV蛋白编码序列，添加了外源基因的表达盒。唯一的病毒来源序列是ITR，它们是在病毒包装过程中指导AAV复制和包装所必需的。病毒编码序列的完全去除使AAV的包装能力最大化，并且有助于它们在体内递送时的低免疫原性和细胞毒性。

AAV血清型

现阶段研究人员已发现12种人类AAV 血清型（AAV1至AAV12）和 100多种非人类灵长动物AAV血清型。不同AAV血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性，因而其识别与结合的细胞表面受体也相应有很大差别，这也导致不同血清型转染的组织类型、细胞类型和感染效率也各不相同。下表是AAV1至AAV9的不同组织亲噬性。

AAV包装流程

科沿有道生物可以提供从AAV质粒设计、构建、包装至表达分析的全套服务。不仅如此，科沿有道生物也可以提供全面的AAV载体和表达系统，用于体内和体外表达human/mouse/rat ORFs，lncRNA、circRNA、shRNAs和CRISPR/gRNA。科沿有道生物生产的AAV具有滴度高、纯度高和稳定性高的三高优点。下面是AAV从头合成的流程：

AAV滴度检测

科沿有道生物的AAV病毒是通过用qPCR的方法来检测的病毒滴度，得到的结果为包装得到的病毒颗粒数。其原理是用腺相关病毒基因组特异性引物进行实时定量PCR。在定量曲线的线性范围内，Ct值与已知拷贝数质粒的Ct值的比值即为病毒基因组的初始拷贝数。

服务特色

1、载体全：多种组织特异性启动子和多种报告基因可供客户选择。

2、货期短：AAV克隆载体均与我们18,000个预制人源ORF cDNA克隆MCS区通用，行业中生产周期短。

3、滴度高：可提供1012V.G/ml及以上滴度的病毒.可高达1014V.G/ml。

4、服务优：可根据客户具体实验，由公司专业技术人员提供载体构建方案，提供特殊定制服务。

慢病毒包装市场宣传资料

慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

科沿有道生物提供慢病毒载体构建、RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。

我们的慢病毒产品主要为第四代质粒系统，其特点为高表达，高滴度，快速克隆和易检测。慢病毒滴度可达到十的八次方 TU/mL，不必浓缩和纯化，就能感染目的细胞并且通过GFP, 发出的绿色荧光来筛选，可以不同实验者的实验需求，使后续的实验更加方便快捷。

整体实验流程（1、2、3为并列步骤）

1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，采用PCR技术(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（cDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。

3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。

4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒（两质粒包装系统），三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。