基于iTRAQ的定量蛋白组分析

iTRAQ (Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)即等重标签标记用于蛋白质相对和绝对定量技术。它是美国Applied Biosystems公司研发的蛋白质组定量专利技术。该技术可实现对多种不同样品中蛋白的比较，如用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。来自不同样品的同一肽段经 iTRAQ 试剂标记后具有相同的质量数，并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后，在二级质谱检测(MS2)中，不同的报告基团被释放，它们各自的质谱峰的信号强弱，代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。

易科学推出基于iTRAQ的定量蛋白组分析服务技术，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的蛋白寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括蛋白酶切、肽段标价、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

实验原理

iTRAQ试剂包括三部分： 1. 报告基团（reporter group）：相对分子量为113-121Da（无120），因此iTRAQ试剂可同时标记8组样品。 2. 平衡基团（balance group）：相对分子量为192-184Da (无185)，使得八种iTRAQ试剂分子量均为305 Da，保证标记的同一肽段m/z相同。 3. 肽反应基团：能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接，从而标记上肽段拿到蛋白样品之后，不同组的样品首先分别进行等量酶切，每一个酶切得到的肽段样品选择一种标记试剂进行标记反应（每一个肽段至少含有一个游离的氨基进行反应）；然后将经过不同标记的肽段样品混合后进行后续的质谱分析。来自不同样品的同一肽段经iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数，并在一级质谱检测（MS1）中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后，在二级质谱检测（MS2）中，不同的报告基团被释放，它们各自的质谱峰的信号强弱，代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。

研究路线

技术优势

1. 可同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析

2. 分离能力强、分析范围广，定性分析结果可靠；

3. MS具备高灵敏度、检测限低；

4. 自动化程度高、分析时间快，分离效果好；

5. 适合广泛样品类型：胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等；

6. 与凝胶分离的蛋白质定量技术相比，iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子，如低丰度蛋白质、强酸（碱）性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。

样品要求

1. 如果您提供的是组织样品，请您干冰将组织样品寄给我们；植物组织样本最少200mg，血液样品至少1ml(血浆注意用EDTA防凝)，血清0.2-0.5ml，尿液2ml，动物组织样品至少1g，细胞样品为1X107个细胞，酵母、微生物等干重200mg。

样品类型	送样要求
常规动物组织	至少1g
坚硬动物组织	至少1g
动物毛发	20mg
常规植物组织	最少200mg
木本植物的树根、树皮、树枝等	5g
果实种子	0.5g
花粉	150mg
微生物	干重200mg
动物细胞	1×10^7个细胞
血液	至少1ml(血浆注意用EDTA防凝)
血清、血浆	0.2-0.5ml
乳汁	2ml
脑脊液、关节液和淋巴液	0.5ml
唾液	0.1ml
泪液	300μl
尿液	15ml
分泌蛋白	10ml

2. 如果您提供的是蛋白样品，请您保证蛋白总量在100ug以上；蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可。
3. 样品运输：请使用足量的干冰运输，并且尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

服务周期及报价

服务周期：4-5周

报价：4800RMB/样品，包含生物信息学分析

结果展示

我们会根据您的要求提供技术报告