一、为什么要分析二硫键？

二硫键不仅维持蛋白质三级结构的稳定性，还影响其生物活性与构象完整性。错误的二硫键配对可能导致：

（1）功能丧失（如失活的抗体）

（2）聚集或不溶性蛋白

（3）免疫原性风险增加（药物开发中常见）

因此，精准识别二硫键的连接方式和位置，是蛋白结构功能研究的关键步骤。

二、如何分析蛋白的二硫键？

1、还原/非还原质谱对比法

（1）原理：

通过对同一样本在还原（如DTT、TCEP处理）与非还原状态下进行蛋白酶消化和质谱分析，比较肽段的差异，推测二硫键连接关系。

（2）实验流程：

• 分别准备还原和非还原样本
• 酶解（如胰蛋白酶）
• LC-MS/MS 检测
• 分析差异肽段：非还原样本中出现跨肽段连接的峰即为潜在二硫键

（3）优势：

• 操作简便，适用于大多数蛋白
• 可识别二硫键连接的肽段

（4）局限：

• 无法精确定位连接的Cys残基
• 对复杂蛋白（如多二硫键抗体）解析能力有限

2、ETD/ECD 质谱技术

（1）原理：

ETD（Electron Transfer Dissociation）和ECD（Electron Capture Dissociation）可在保留二硫键的同时对多肽主链进行断裂，从而实现二硫键原位保留、Cys定位。

（2）实验流程：

• 非还原条件下进行蛋白酶解
• 使用ETD或ECD进行MS/MS碎裂
• 精确识别跨肽段及Cys残基位置

（3）优势：

• 原位保留二硫键结构
• 可准确定位Cys-Cys配对
• 对于结构复杂蛋白（如IgG）效果更好

（4）局限：

• 仪器依赖高端质谱（如Orbitrap Fusion、Exploris系列）
• 数据分析相对复杂

3、Top-down 质谱法

（1）原理：

直接对完整蛋白进行MS/MS碎裂，无需酶解，保留所有天然构象信息，包括二硫键。

（2）优势：

• 保留蛋白原始构象
• 适用于蛋白药物完整性验证

（3）局限：

• 仅适用于低分子量蛋白（<50 kDa）
• 对仪器要求极高，灵敏度受限

4、定点突变验证（Cys→Ser）

通过点突变手段去除特定Cys残基，结合功能检测与质谱分析，验证其是否参与关键二硫键。

优点：可验证功能影响

缺点：实验周期长，非高通量方法

三、百泰派克生物科技蛋白二硫键分析优势

百泰派克生物科技为研究者提供高分辨率、高灵敏度的蛋白二硫键分析解决方案，支持从构象研究到药物质控的全流程需求。

1、技术平台支持

（1）Orbitrap Exploris 480 / Fusion Lumos

（2）ETD碎裂功能全面支持

（3）高覆盖率蛋白酶解策略（Trypsin、Lys-C、Glu-C等组合）

2、服务亮点

（1）可实现抗体重链-轻链连接位点识别

（2）支持天然蛋白与重组蛋白的二硫键图谱构建

（3）专属技术顾问协助设计实验策略

四、应用场景举例

精准解析蛋白质中的二硫键，不仅有助于揭示其结构与功能关系，更在药物研发和生物合成领域具有重要应用价值。通过现代质谱平台与专业技术团队的协作，科研人员可以更清晰地绘制出蛋白构象的“地图”。若您正开展蛋白质结构、功能或药物相关研究，欢迎联系百泰派克生物科技获取专业的二硫键分析服务。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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