DuGreen 核酸染料（10,000× 水溶液）
DuGreen 核酸染料特点
● 无毒性：DuGreen 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验
结果也表明，该染料的诱变性远小于EB。
● 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。
● 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
● 操作简单：在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用可见光凝胶透射仪观察。
● 适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：适用于使用254nm 激发的紫外凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置。
DuGreen 使用方法简介
1．胶染法（用法同EB）（推荐方法）
（1） 制胶时加入DuGreen 核酸染料。（例如：每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL DuGreen 10,000× 储液，以此比例类推）。
（2） 按照常规方法进行电泳。
注意事项：
u 此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。
u 由于DuGreen 具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将DuGreen 储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。DuGreen 兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
u 含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
u 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。
u 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
2．泡染法
（1） 按照常规方法进行电泳。
（2） 用H2O将DuGreen 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如将15μL DuGreen 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。
（3） 将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右。
注意事项：
u 用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
u 3× DuGreen 染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
几种核酸染料比较
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名称 |
灵敏度 |
稳定性 |
对DNA迁移的影响 |
安全性 |
适用性 |
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DuRed |
高 |
高 |
条带不弯曲，DNA片段不迁移 |
① 是一种独特的油性大分子，不易挥发升华，不易吸入人体，不能穿透细胞膜进入活体细胞内，安全无毒。
② 艾姆斯氏测试结果表明，DuRed在凝胶染色浓度下完全没有诱变性，因此完全没有致癌毒性。 |
通用大小片段电泳染色，与EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置。标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用，使用普通紫外凝胶透射仪观察即可，在300nm紫外光附近可得到最佳激发。 |
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DuGreen |
高 |
高 |
条带不弯曲，DNA片段不迁移 |
① 是一种独特的油性大分子，不易挥发升华，不易吸入人体，不能穿透细胞膜进入活体细胞内，安全无毒。
② 艾姆斯氏测试结果表明，DuGreen在凝胶染色浓度下完全没有诱变性，因此完全没有致癌毒性。 |
通用大小片段电泳染色，适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
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SYBR Green I |
高 |
低 |
染料浓度较高时，条带容易弯曲，DNA片段迁移的现象明显 |
属花箐染料，能透过细胞膜进入活体细胞内，但容易生物降解，不会在体内残留，安全无毒。 |
100bp以上电泳染色，适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
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EB |
低 |
高 |
条带不弯曲，DNA片段不迁移 |
① 分子量小，易挥发升华，易吸入人体，不易生物降解，在体内长期残留。
② 艾姆斯氏测试结果表明，EB容易引起有机体突变，是一种强诱变剂，具有高致癌性。 |
100bp以上电泳染色，背景荧光信号高；使用普通紫外凝胶透射仪观察。 |
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Goldview |
低 |
高 |
条带不弯曲，DNA片段不迁移 |
① 主要成分为吖啶橙，是一种煤焦油提取物，具有高毒，致癌，高诱变性。
② 易挥发升华，易吸入人体，能穿透细胞膜进入活体细胞内，不易生物降解，在体内长期残留。 |
100bp以上电泳染色，背景荧光信号高；适用于使用254nm激发的紫外凝胶透射仪或可见光凝胶透射仪观察。 |
特别提醒：
u 如果您使用的是紫外成像仪，请选择DuRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择 DuGreen。尽管在凝胶染色方面，DuGreenTUNEology 波长可调检测卡盒-->
