在进行表达载体的构建、目的蛋白质的表达等实验时，通常需要获得一段目的基因。我们可以根据您提供的已知参考序列 (NCBI上已发表)，以基因组DNA或总RNA为模板，获取您所需要的某个区域的一段基因，并将之与克隆载体进行体外连接，然后再转化到宿主菌中进行克隆、筛选，以此获得质粒重组体。

一、服务内容

1. 基因钓取

8基因组DNA/总RNA的提取

8以基因组DNA为模板通过PCR扩增得到目的基因

8以总RNA为模板通过RT-PCR扩增得到目的基因

8目的基因PCR产物的纯化及测序

8目的基因的克隆及测序

2. 基因克隆

8目的基因的转载体：将含有目的基因的质粒采用双酶切的方法克隆至商品化的表达载体或改造后的特殊载体上。

8如果客户提供PCR产物进行亚克隆：我们建议先进行TA克隆，再进行亚克隆。

8目的基因的PCR克隆：将模板（通常为质粒）上的一段序列通过PCR加酶切位点后克隆至商品化的表达载体或改造后的特殊载体上。

8对已有载体进行改造。

二、实验步骤及周期

8从动物组织或细胞中获取gDNA或者cDNA；2～3个工作日。

8PCR扩增相关基因或功能元件，连接至T载体测序；8～9个工作日。

8将测序后符合要求的基因或功能元件片段亚克隆至目的载体；10个工作日。

三、基本费用

1. 基因钓取

扩增的基因或功能元件大小在1.5k以内，800元；
片段大小在1.5k～2.5k，1200元；
片段大小在2.5k～3.0k，1600元。

注: 1). 以上实验费用及周期是针对正常实验样品制定的，样品特殊(包括样品中基因丰度较低、核酸含量较少或者所需调取基因较长的样品等)或样品多时除外。

2). 亚克隆费用请参见亚克隆部分（如客户只需要连接在T载体上的基因或功能元件片段，此费用可免）。

2. 基因克隆

根据客户要求将指定片断按照相应的方向和读框装入指定表达载体，如克隆位点无特殊要求，我们将自行选择合适的酶切位点

注：1、以上价格均不含测序的费用，如需测序，费用另计；

2、我们仅提供TA克隆载体（载体为pMD18-T），除此以外的载体需自己提供;

3、以上实验费用是针对DNA片段长度小于2 kb的情况制定的，若DNA片段长度超过2 kb时，具体

价格请来电咨询；

4、非常用限制性内切酶由客户自己提供，或我们帮忙订货，费用客户自理，剩余产品返回。

四、交货内容

8实验报告(包括实验操作步骤、图片、引物序列等)、

8测序彩色波形图、序列碱基图

8保存电子版结果的CD光盘

8含有目的基因的重组质粒及甘油菌、引物等

五、客户须知

1. 基因钓取

8我们目前接收的样品形式为与参考序列物种一致的材料或上述材料的基因组DNA/总RNA。

8实验材料必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂

8基因组DNA/总RNA无明显降解，总量大于5 μg。基因组DNA浓度大于10 ng/μl，总RNA浓度大于200 ng/μl。如果基因丰度较低或调取的基因较长，请您提供尽量多的材料。

8由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因，我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致。

2. 基因克隆

8请提供目的DNA的来源及背景资料，TA克隆须提供PCR原液50ul以上或DNA模板及相应的上下游引物;亚克隆须提供原始模板（质粒图谱、酶切位点、测序报告等）和目的载体及信息(质粒图谱)。

8如果所提供模板需本公司进行PCR扩增时，我们将采用高保真DNA聚合酶进行PCR反应，但不承诺测序结果与参考序列的碱基完全一致。

8我们仅保证克隆到载体的基因片段为您所提供的基因，所以请事先对目的基因进行验证，确保模板的准确性；如果您想对PCR产物进行亚克隆，我们建议先进行克隆测序。

8由于某些基因在克隆载体或表达载体中会有表达，而表达产物会抑制宿主菌生长。因此，我们不保证所有的基因都能够成功进行克隆或者亚克隆。