E.coli DH5α感受态细胞

保存条件：-80℃。

1.产品简介：

本产品是采用大肠杆菌E.coli DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，实验室最常用的克隆感受态细胞，转化效率高，可用于蓝白斑筛选。

基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

特点：1．DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量。2．重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。3．φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的

β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培 12-14 小时才能看见克隆。pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg DNA。

2.使用说明：

1．取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。

2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30min。

3．42℃热击45sec，然后快速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min，该过程不要摇动离心管。

4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45～60min使菌体复苏。

5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12~16h。

3.注意事项：

1．刚化冻的细胞转化效率最高，避免反复化冻。

2．整个动作要轻柔。

*本试剂仅供实验室研究使用