北京经纬博恒生物科技开发有限责任公司
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建立高灵敏度和特异性的白介素8 ( IL - 8) EL ISA 法。用人工重组的IL - 8 多次免疫兔, 获取高效价抗 体。纯化抗体经生物素标记, 同辣根过氧化酶(HRP) 标记的亲和素可特异结合。采用纯化的抗体包被96 孔 板, 形成固相抗体。加入不同浓度标准品后, 反应1. 5h , 洗净后再加入生物素标记抗体, 以酶标记亲和素作为 探针, 经酶底物显色反应可获得良好的EL ISA 标准曲线。该方法测定范围为0. 2 - 10. 8ng/ mL , 最低测出值为 0. 02ng/ mL , 批内和批间CV 小于8 %和10 %。用该法测得18 名正常人血浆中IL - 8 水平为0. 15 ±0. 06ng/ mL 。18 份高低不同浓度IL - 8 水平的血清样品经本法和RIA 测定其均值为0. 54 ±0. 35ng/ mL 和0. 63 ±0. 59 ng/ mL ,相关性强( r = 0. 819 , t = 5. 89) 。在U937细胞系体外培养液中, L PS 刺激24h 和48h 可测出IL - 8 水平 明显上升; 而经TNF -α刺激24h 和48h 后同对照没有明显变化。该方法操作简便, 具有较强灵敏度和特异 性,可满足人血清和细胞培养液中IL - 8 水平的检测。