服务流程

服务说明

MTT MTS CCK8

       反映细胞增殖情况；通常连续检测5天，获得细胞增殖曲线；检测细胞增殖最经济常用的方法，MTT只适用于贴壁细胞，MTS/CCK8可用于悬浮细胞。

技术原理

   活细胞特别是增殖期细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT（即黄色噻唑兰）还原成难溶于水的蓝紫色针状Formazan结晶并沉淀在细胞中，且Formazan的形成量与细胞活力成正比，二甲基亚砜（DMSO）能够溶解Formazan结晶，用酶标仪在特定波长处测定其吸收值，即可间接反映细胞增殖情况。MTS及WST–8（CCK-8试剂）都是新型唑类化合物，和MTT一样，同样都能被细胞线粒体中的脱氢酶还原，MTS及WST–8被还原后的Formazan化合物具有高度水溶性，无需再用加DMSO，可直接用酶标仪在特定波长处测定吸收值。

      因还原生成的甲臜物数量与活细胞的数量成正比，MTT、MTS、CCK-8均可用于细胞增殖的检测，目前被广泛应用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

吉凯应用实例

      为研究某基因是否是某肿瘤细胞增殖相关的关键基因，可将目的基因shRNA慢病毒感染靶细胞，使靶细胞内源表达的目的基因表达下调，随后用MTT进行检测，观察目的基因表达下调后的细胞与对照细胞相比细胞增殖的变化，从而推断结论。

   用待研基因shRNA慢病毒感染A375细胞，3天后收集细胞，按2000/孔的细胞数量接种细胞至96孔板，第二天待细胞贴壁后，开始进行MTT检测，连续检测5天，获得细胞增殖曲线。结果显示，shRNA下调目的基因表达后，细胞增殖显著减缓，表明待研基因与A375细胞增殖显著相关。

BrdU EdU

   可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗BrdU单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

技术原理

        溴脱氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine, BrdU）是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，可竞争性掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶，利用抗体连接酶或荧光素作为指示系统标记BrdU，当处于旺盛分裂的细胞掺入BrdU后，即可检测出含有BrdU的细胞，并以此判断细胞的数目。固相包被细胞的微孔中加入BrdU抗体，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的BrdU呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过OD值的高低，反映正在合成DNA细胞数的多少，从而反映正处于增殖状态的细胞量。

吉凯应用实例

       用待研基因shRNA慢病毒感染T24细胞，3天后收集细胞接种96孔板，待细胞贴壁后第一天和第四天进行Brdu检测，结果显示，shRNA下调目的基因表达后，细胞增殖显著减缓，表明待研基因与T24细胞增殖显著相关。

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