H2S 含量测定试剂盒说明书
可见分光光度法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂五:液体 3mL×1 管,4℃避光保存。
产品说明:
H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在
665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计 1ml 玻璃比色皿、蒸馏水。
操作步骤:
一、样品处理:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议
500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7
秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清(浆):直接测定。
二、测定步骤: (取 1.5ml 离心管,按照下表操作)
|
空白管 |
测定管 |
样品(μL) |
|
250 |
H2O(μL) |
250 |
|
试剂一(μL) |
250 |
250 |
充分震荡混匀 |
||
试剂二(μL) |
250 |
250 |
12000rpm,4℃,离心 10min,去上清,留沉淀 |
||
H2O(μL) |
500 |
500 |
12000rpm,4℃,离心 10min,去上清,留沉淀 |
||
试剂一(μL) |
250 |
250 |
试剂三(μL) |
250 |
250 |
充分震荡混匀 |
||
试剂四(μL) |
250 |
250 |
12000rpm,4℃,离心 10min,取上清 |
||
试剂五(μL) |
50 |
50 |
混匀,25℃静置20min,于微量石英比色皿/96孔板中,空白管调零,测定665nm吸光值, 记为A665。 |
三、H2S 含量计算公式:
标准曲线回归方程为:y = 0.0044x,R2 = 0.9988
(1)组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S(μmol/mg prot)= A665÷0.0044×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S(μmol/g)= A665÷0.0044×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10
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