自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
透析原理
透析是指溶质在浓度梯度的驱使下,选择性扩散通过半透膜,从而达到大/小分子分离,膜两侧浓度平衡。即小分子的溶质通过膜,而大分子物质不能通过,被截留在膜另一边。
如果将样品置于透析膜管内,通过置换膜管外部的透析缓冲液,就可将小分子物质基本清除,从而达到纯化大分子物质的目的。最佳截留分子量(MWCO)取决于具体的应用。
透析袋应用
透析袋通常是由半透膜制成的袋状容器。常应用于比如蛋白质和DNA的脱盐浓缩,纳米材料的筛选,中药成分萃取后有机溶剂的去处等。
透析袋品牌
目前市场上主要透析袋品牌,亦默瑞主推品牌如下:
透析袋的分类
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜。
1、生物技术纤维素酯(CE)膜
生物学惰性和超纯的生物技术CE膜提供广泛的可选孔径(9种)和尺寸,用于带电荷分子的分离及大分子纯化。3种材质中,生物技术CE膜对条件及溶剂要求较高。一般而言,CE膜能够抗弱的或稀的酸碱溶液和轻微乙醇,MWCO只有轻微改变。直接与有机溶剂接触会破坏CE膜。生物技术CE膜只能在pH2-9与4-37℃下使用。即用透析装置中也可使用CE膜。
2、生物技术再生纤维素(RC)膜
生物技术RC膜通过再生过程制得,物理抗性与化学相容性得到改良,具有与生物技术CE膜一样高纯度与均一的MWCO。RC膜能够与高浓度的弱酸碱、低浓度的强酸碱、大多数醇类及一些温和的或低浓度有机会溶剂共用,直接与强极性或有机会溶剂接触会破坏RC膜。生物技术RC膜能在pH2-12与4-60℃条件下使用。
3、标准等级再生纤维素RC膜:Spectra/Por 1-7
标准等级再生纤维素(RC)由从棉毛纤维提取的天然纤维素构成,可广泛应用于实验室透析。这种透明、柔韧的膜孔径均一且低廉、结实,非常适用于脱盐、缓冲液置换、大分子纯化及其他一般应用。由于具有广泛的化学相容性,标准RC膜能够与稀强酸碱液、高浓度的弱酸和弱碱、大多数醇类及一些温和的或低浓度有机溶剂(包括DMSO)共用,但与一些强有机溶剂接触可能会破坏RC膜,标准RC膜能够在pH2-12和4-121℃条件下使用。
CE膜与RC膜的对比
名称生物技术级纤维素酯膜(CE)生物技术级再生纤维素膜(RC)
膜类型对称纤维素酯对称再生纤维素
截留分子量0.1-0.5KD、0.5-1KD、3.5-5 KD、8-10KD、20KD、50KD、100KD、300KD、1000KD3.5-5KD、8-10KD、20KD
物理特性不透明、质地较硬不透明、柔软
有机溶剂耐受性中等优良
扁平宽度10、16、24及31mm10mm和16mm
样品容量范围0.5ml到60ml0.5ml到30ml
pH值范围2~92~12
建议的温度极限37℃60℃
如何选择透析袋
1透析袋命名
2 透析袋参数
*压平宽度(MD),7-140mm;
*半周长;
*直径;
*单位体积(装载量)。
压平宽度(MD)=π*直径(R)/2=周长的一半,直径(R)=2*压平宽度(MD)/π
3 截留分子量
*定义
由于透析膜由海绵状交联聚合物组成,代表膜孔径的截留分子量(MWCO)是一个间接衡量膜分离性能的参数。更准确的说,膜的截留分子量可定义为截留率至为少90%的溶质的分子量。
截留分子量为道尔顿,英文Da,简称D,1000Da=1KD
*½原则
由于溶质的渗透特性取决于分子形状、水合化程度、离子电荷和极性,我们建议选择截留分子量是被截留物质的分子量的一半/或是将要透过的物质的最大分子量的两倍。
*截留分子量的分布
100Da-1000000Da
*型号选择参考
100-500(100)
500-1000(500)
7000(6000-8000)
14000(8000-14000/12000-14000)
下期将为你逐一介绍默瑞透析产品畅销品牌Spectrumlabs和Viskase,敬请关注。